總抗氧化狀態(tài)（TAS）檢測試劑盒（微量法）

注意：各組分（小管試劑）開蓋前，請先低速離心。

液體試劑均為即用型。

陽性對照：加入1mL提取液來溶解，混勻得到母液。然后取0.1mL母液加到0.9mL提取液中混勻。濃度是 0.1mg/mL，4℃保存。

工作液的配制：臨用前配制，將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，現(xiàn)配現(xiàn)用。

動物組織：稱取0.1g樣本，加入1mL 提取液，冰浴勻漿，轉(zhuǎn)移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃離心10min，取上清液于新離心管中，置冰上檢測。

植物組織：稱取0.1g樣本，加入1mL提取液搗碎，冰浴超聲波破碎 5min（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s，重復(fù)30次），轉(zhuǎn)移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 離心10min，取上清液于新離心管中，置冰上檢測。

細(xì)胞或細(xì)菌：收集500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，用冷PBS清洗細(xì)胞，離心后棄上清，加入1mL提取液，冰浴超聲波破碎5min（功率20%或200W，超聲3s，間隔7s，重復(fù)30次），轉(zhuǎn)移到1.5mL EP管中，10,000g，4℃ 離心10min，取上清液于新離心管中，置冰上檢測。

血清、血漿或尿樣：直接檢測。

注意：1. 推薦使用新鮮樣本，如果不立即進(jìn)行實驗，樣本可在-80℃保存1個月。

2. 不能用EDTA作為血漿樣品的抗凝劑。樣品中也不能含有DTT、巰基乙醇、Tween、Triton和NP-40等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。

3. 如需測定蛋白濃度，推薦使用BCA法蛋白質(zhì)定量試劑盒進(jìn)行樣本蛋白質(zhì)濃度測定。

1. 酶標(biāo)儀或可見光分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到593nm，可見光分光光度計去離子水調(diào)零。

2. 樣本測定（在96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入下列試劑）：

3. 充分混勻，室溫反應(yīng)5min，于593nm測定吸光值，計算ΔA測=A測定-A空白（空白孔只需做1 個）

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗，如果A測定大于1.5，樣本可用提取液進(jìn)一步稀釋，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

1.總抗氧化能力計算標(biāo)準(zhǔn)曲線公式： y=4.4664x+0.0685，R2 = 0.9986，其中y為Fe2+終濃度(μmol/mL)，x為吸光值差值ΔA， 將ΔA測帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，求得y(μmol/mL)。

2.樣本中TAS計算：

單位定義：樣本的抗氧化能力以達(dá)到同樣吸光度變化值（ΔA）所需的標(biāo)準(zhǔn)液Fe2+離子濃度（μmol/mL）表示。

（1）按樣本鮮重計算

TAS（μmol/g 鮮重）=y×V樣÷(V樣÷V樣總×W)×n=y÷W×n 

（2）按樣本蛋白濃度計算

TAS（μmol/mg prot）=y×V樣÷(V樣×Cpr)×n=y÷Cpr×n

（3）按細(xì)胞或細(xì)胞數(shù)量計算

TAS（μmol/104 cells）=y×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×n=y÷細(xì)胞數(shù)量×n

（4）按液體體積計算

TAS（μmol/mL）=y×V樣÷V樣×n=y×n

V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；W：樣品質(zhì)量，g；n：樣本稀釋倍數(shù)；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細(xì)胞數(shù)量：以 104為單位。